高效液相色谱-串联质谱检测基因组DNA甲基化方法的建立

• 作者: 任晓虎 刘建军 叶金波 张航 杨细飞 汤瑞华 胡俊杰 胡韬 黄培武 黄海燕
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 高效液相色谱 串联质谱 DNA甲基化
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 537-541
• 页数: 5页
• 分类号: Q503
• 字数: 3777字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.04.020

摘要

目的：建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-ESI-MS/MS）检测基因组DNA甲基化水平的方法。方法：以5-mdC和dG为标准品，采用全自动高效液相色谱系统进行分离，串联电喷雾质谱检测，选择多反应监测模式（MRM）测定标准品，绘制标准工作曲线。结果：在MRM模式下选取5-mdC（m/z 241.9→126.3）和dG（m/z 268.1→152.3）分别作为定量检测的母子离子对，各化合物能实现良好的基线分离；5-mdC和dG碰撞能均为15 eV，去簇电压分别为40和45 V，最低定量限分别为1.65和2.47 fmol；标准品的响应值比为90%~110%；5-mdC含量的天内相对标准偏差和天间相对标准偏差均小于8%。结论：HPLC-ESI-MS/MS是能应用于检测基因组DNA甲基化的一种高通量、高准确率、高分辨率、高灵敏度且重复性好的方法。