NO信号通过I-kappaB磷酸化激活人肝细胞内源凝血因子Ⅷ重表达的调控作用

• 作者: 何玉霞 周云飞 张军 温泉 王娟
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人凝血因子Ⅷ L-精氨酸 一氧化氮信号通路 磷酸化
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1155-1160
• 页数: 6页
• 分类号: R394
• 字数: 4226字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140606

摘要

目的：建立一氧化氮（NO）前体化合物 L-精氨酸激活人肝细胞 L02内源凝血因子Ⅷ（FⅧ）重表达的分子细胞生物学模型，探讨 NO信号激活 L02中内源 FⅧ重表达的调控通路及分子基础。方法：取对数生长期 L02细胞随机分为对照组、加药组（L-精氨酸）、抑制剂组（L-NAME和 L-精氨酸）和抑制剂对照组（L-NAME），分别培养12、24、36、48和60 h，采用流式细胞术检测作用48 h后 L02中人 FⅧ蛋白的表达，Griess法检测不同时间点 L02细胞内 NO水平，RT-PCR法检测 L02中人 FⅧ基因、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因、核转录因子（NF-κB1）基因和核因子κB（免疫球蛋白κ轻链基因增强子）抑制蛋白α亚基（I-κB alpha）基因的转录水平， Western blotting法检测 L02中人磷酸化 I-kappaB（磷酸化 I-κB）表达水平。结果：流式细胞术检测，加 L-精氨酸培养48 h后L02中出现人FⅧ蛋白的表达。Griess法检测，加药组L02在3、6和12 h内NO表达水平显著增加（P＜0.05），随后又基本恢复到正常水平，正常组、抑制剂组和抑制剂对照组 L02细胞内 NO 水平无变化；RT-PCR检测，加药组 L02中人 FⅧ mRNA转录；对照组、抑制剂组和抑制剂对照组均无人 FⅧ mRNA的转录，加药组 iNOS、NF-κB1和 I-κB alpha转录水平均上升（P＜0.05），对照组、抑制剂组和抑制剂对照组上述基因转录水平均无明显变化。Western blotting 法检测，加入 L-精氨酸后，磷酸化 I-κB表达水平明显增加（P＜0.05），其他组则无此变化。结论：L-精氨酸通过 NO信号通路进而激活 I-κB磷酸化，导致人 FⅧ基因启动子上游调控相关的转录因子 NF-κB1进入胞核从而激活人离体肝细胞 L02中内源人 FⅧ的表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王娟	重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	63	214	7.0	12.0
2	温泉	重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	2	5	2.0	2.0
3	何玉霞	重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	2	2	1.0	1.0
4	周云飞	重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心	2	2	1.0	1.0