TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究

• 作者: 向国艳 张雲乔 方芳 朱杭飞 白雪松 藏雨轩 袁忠海 郝峰 鞠晓红
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 跨膜蛋白16A 钙激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1633-1639
• 页数: 7页
• 分类号: R363
• 字数: 6050字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.09.015

摘要

目的：探讨跨膜蛋白16A（TMEM16A）钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮（FRT）细胞的表达及其电生理特性。方法：构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞，同时优化脂质体和载体的量和比例，获得最佳转染效率和表达效果，杀稻瘟菌素（ blasticidin ）进行抗生素筛选，获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。 RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况；倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位；应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果：BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中；RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A，倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达；应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论：FRT细胞可高效表达TMEM16A。 TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝峰	吉林医药学院生物化学检验教研室	44	70	3.0	5.0
2	白雪松	吉林医药学院营养教研室	21	78	4.0	8.0
3	袁忠海	吉林医药学院生物化学检验教研室	19	100	6.0	9.0
4	藏雨轩	吉林医药学院生物化学检验教研室	3	6	2.0	2.0
5	朱杭飞	吉林医药学院生物化学检验教研室	2	6	2.0	2.0
6	向国艳	吉林医药学院生物化学检验教研室	2	6	2.0	2.0
7	张雲乔	吉林医药学院生物化学检验教研室	2	6	2.0	2.0