猪圆环病毒2型流行株的分离及其感染性克隆的构建

• 作者: 同戈 李延鹏 邵定勇 陈瑞爱 黄文科 黄红亮
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 猪2型圆环病毒 全基因 感染性克隆 序列分析
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 兽医微生物
• 页码范围: 1168-1174
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130490

摘要

[目的]通过分离一株猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株,并构建其感染性克隆,为研究PCV2基因功能提供操作平台.[方法]通过PCR方法,从疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的仔猪淋巴结中鉴定为猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)2型阳性.把阳性病料接种PK-15细胞传代培养,在培养物中扩增出PCV2的全基因序列.对扩增出的全序列进行序列测定,并与GenBank中公布的5株广东PCV2分离株(GD-pz、GD-gj、GD-jm、GD-ss和GD-sz)进行同源性分析.通过EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ将PCV2全基因组序列克隆进pUC 18载体中,获得含PCV2 GD-zq株全基因组单拷贝的重组质粒pPCV2-GD-zq,再通过SalⅠ和Hind Ⅲ把另一个全长拷贝克隆进pPCV2-GD-zq质粒中,使PCV2 GD-zq株基因组DNA以头尾相接的双重复方式克隆进pUC 18载体中,获得重组质粒pPCV2-2GD-zq.将pPCV2-2GD-zq DNA纯化和定量后转染PK-15细胞,拯救PCV2 GD-zq病毒.[结果]从PMWS感染的猪淋巴结中分离到了一株PCV2,命名为GD-zq株;序列分析结果显示,GD-zq株全基因组为1 767 bp,与GenBank中公布的5株广东PCV2分离株ORF1核苷酸一致性为97.1％-99.7％,编码氨基酸一致性为98.7％-100％; ORF2核苷酸一致性为93.2％-99.6％,编码氨基酸一致性为92.3％-99.1％;全基因一致性为96.0％-99.6％. pPCV2-2GD-zq质粒转染PK-15细胞后,其通过间接免疫荧光实验(IFA)能从转染细胞及其传代细胞中,检测到拯救出的病毒.[结论]分离了一株PCV2广东株GD-zq,成功构建了PCV2 GD-zq株的感染性克隆.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈瑞爱	华南农业大学兽医学院	33	113	6.0	8.0
5	李延鹏	中国农业科学院生物技术研究所	9	87	5.0	9.0
6	邵定勇		1	5	1.0	1.0
7	同戈		1	5	1.0	1.0
8	黄红亮		1	5	1.0	1.0
9	黄文科		1	5	1.0	1.0