Calcein-AM荧光扫描测定细胞毒方法的建立

• 作者: 丁哲纯 吴凤麟 邵红伟 郭雯静 陶嫦立 黄树林
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Calcein-AM 细胞毒 荧光释放测定
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1364-1368
• 页数: 5页
• 分类号: R392.33
• 字数: 4159字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.10.014

摘要

目的：建立和优化基于钙黄绿素-AM（ Calcein-AM）荧光扫描的细胞毒测定方法。方法：首先使用Calcein-AM染色靶细胞，扫描检测Calcein-AM荧光值，确定Calcein-AM最佳激发波长和发射波长；然后优化Calcein-AM染色的浓度和时间；最后以效靶比为30∶1～1∶1，共孵育时间为4 h，荧光扫描测定靶细胞裂解的百分率。结果：荧光染料Calcein-AM能有效标记靶细胞，最佳激发波长和发射波长为485 nm和515 nm；Calcein-AM对细胞毒性低，不影响细胞活性；4 h内的自发释放率低于15％；CIK（ Cytokine induced killer ）效应细胞与靶细胞共孵育4 h的细胞毒效应随效靶比增加而升高。结论：建立和优化了Calcein-AM荧光染料标记靶细胞检测细胞毒效应的方法，该方法可避免放射性试剂的应用，对细胞毒性低，准确性高。