猪流行性腹泻病毒、猪肠道病毒9型及猪嵴病毒三重RT-PCR检测方法建立及初步应用

• 作者: 任玉鹏 刘燕 岳华 张斌
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多重RT-PCR PEDV PEV-9 PKV 检测
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 603-608
• 页数: 6页
• 分类号: S858.285.3|S852.659.6
• 字数: 3820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.014

摘要

旨在建立一种同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪肠道病毒9型(PEV-9)、猪嵴病毒(PKV)的三重RT-PCR法,并初步应用于临床样品检测.根据GenBank中PEDV和PKV基因序列保守区设计2对引物,参照文献合成1对PEV-9引物,在同一体系进行RT-PCR扩增,对引物浓度、退火温度、灵敏度、特异性等进行优化,应用该法对采自四川省6个猪场46份样品进行检测.结果表明引物量分别为PEDV 0.5 μL、PEV-9 0.25 μL、PKV0.25 μL,退火温度为55℃时扩增效果最理想;本方法最低检测量分别为PEDV 5.97 pg、PEV-9 0.11 pg、PKV0.74 pg;用该方法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪萨佩罗病毒、猪博卡病毒、猪环曲病毒、猪源大肠杆菌、猪源沙门菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌和空肠弯曲杆菌等病原进行RT-PCR扩增时,均无非特异性扩增条带出现.对46份腹泻样品的检测结果显示,PEDV感染率为76.1％、PEV-9为73.9％、PKV为39.1％,3种病原在同一样本检出率达29.1％,表明存在混合感染或协同致病的可能;与单项RT-PCR法相比,阳性样本的检出符合率均在91％以上,表明该方法具较高可信度.建立的方法可快速、准确地检测3种猪腹泻病毒性病原,为病原学诊断和分子流行病学调查提供了有效技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳华	西南民族大学生命科学与技术学院	187	1071	15.0	23.0
2	张斌	西南民族大学生命科学与技术学院	44	166	8.0	10.0
3	任玉鹏	西南民族大学生命科学与技术学院	20	70	4.0	8.0
4	刘燕	西南民族大学生命科学与技术学院	2	7	1.0	2.0