实时荧光定量PCR检测人胰岛素样生长因子及其受体基因的方法学构建

• 作者: 张俊 彭启松 罗光华
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胰岛素样生长因子 受体 实时荧光定量聚合酶链反应 TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 358-361
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 2374字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2014.05.10

摘要

目的 建立检测人胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、IGF-1受体(IGF-1R)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)及IGF-2受体(IGF-2 R)基因的实时荧光定量PCR.方法 设计并合成检测上述4种基因的引物及TaqMan探针;提取胎盘组织RNA并逆转录为cDNA,分别将扩增的4种基因片段纯化后与质粒载体连接,克隆构建含目的基因片段的重组质粒,分别作为定量检测上述4种基因的标准品;用建立的实时荧光定量PCR检测上述4种基因,并用测序验证.结果 PCR扩增产物经测序分析证实分别为上述4种基因的特异性片段;定量检测IGF-1、IGF-1R、IGF-2及IGF-2R的线性范围分别为1.00×102～1.00×108 copies/μL、2.00×102 ～2.00×108 copies/μL、3.00×102 ～3.00×108 copies/μL及5.00×102 ～5.00×108 copies/μL;相关系数(r)分别为0.994、0.993、0.995及0.996;扩增效率分别为92.35％、96.06％、94.92％及98.84％;批间变异系数(CV)分别为1.64％～2.83％、1.73％～1.98％、2.47％～4.09％及2.25％ ～ 2.52％;批内CV分别为1.36％、1.02％、1.04％及0.96％.结论 建立了高度敏感、特异检测人IGF及其受体的实时荧光定量PCR法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张俊	苏州大学附属第三医院综合实验室	66	258	9.0	13.0
2	罗光华	苏州大学附属第三医院综合实验室	86	240	7.0	11.0
3	彭启松	南京市江宁医院检验科	7	31	4.0	5.0