双重实时荧光定量PCR检测人维生素D受体的方法学构建

• 作者: 于洋 喻妙梅 姚霜 张俊 潘丽莉 罗光华
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 受体,骨化三醇 聚合酶链反应 甘油醛-3-磷酸脱氢酶类 维生素D受体 双重实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 应用研究
• 页码范围: 237-240
• 页数: 4页
• 分类号: R331
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/59072

摘要

目的 建立单管检测人维生素D受体(VDR)及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因的双重实时荧光定量聚合酶链反应(dual real-time PCR)的方法.方法 以GAPDH基因为内参,采用Primer Premier 5.0软件设计特异性引物及TaqMan探针,进行PCR扩增检测VDR基因.将VDR及GAPDH扩增产物片段纯化后克隆构建成重组质粒,作为定量检测基因表达的标准品,并用于分析该方法的灵敏度和重复性.结果 PCR扩增产物经测序分析证实为VDR及GAPDH特异性片段;该方法检测VDR与GAPDH灵敏度达40拷贝/μL;线性范围为4.00×101~4.00×105拷贝/μL;决定系数R2分别为0.998、0.999;扩增效率E分别为96.10%、85.15%;批内变异系数(CV)分别为0.09%~1.21%、0.35%~0.88%;批间CV分别为0.17%~0.51%、0.51%~2.46%.结论 成功建立了单管检测人VDR及GAPDH的双重实时荧光定量PCR方法,且该方法特异性好、灵敏度高、可快速高通量检测VDR的相对表达量,有效缩短时间,减小实验误差.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张俊	苏州大学附属第三医院综合实验室常州市个性化诊疗高技术研究重点实验室	66	258	9.0	13.0
2	于洋	苏州大学附属第三医院综合实验室常州市个性化诊疗高技术研究重点实验室	21	54	3.0	6.0
3	姚霜	苏州大学附属第三医院综合实验室常州市个性化诊疗高技术研究重点实验室	5	6	1.0	1.0
4	喻妙梅	苏州大学附属第三医院综合实验室常州市个性化诊疗高技术研究重点实验室	4	7	2.0	2.0
5	潘丽莉	苏州大学附属第三医院综合实验室常州市个性化诊疗高技术研究重点实验室	5	9	1.0	2.0