实时荧光定量PCR检测ESBLs基因型方法的研究

• 作者: 刘慧敏 刘蕊 樊琳 王晨 穆小燕
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 聚合酶链反应 β内酰胺酶类 基因型 抗药性 多药 革兰氏阴性菌
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 839-842,后插5
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2009.10.008

摘要

目的:建立一种快速检测革兰阴性杆菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs )耐药基因分型的SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量PCR方法.方法:针对临床常见ESBLs的耐药基因SHV、TEM、 CTX-M、OXA及其同源性分析,设计了SHV、TEM 、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9、OXA-1、OXA-2及OXA-10 共9对特异性引物,煮沸法提取DNA模板,建立并优化SYBR GREEN I实时荧光定量PCR反应体系,并对其精密度、线性范围进行测定.利用建立方法对51株表型阴性的多重耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌进行ESBLs耐药基因检测,并与改良三维实验进行对比.结果:从39株ESBLs表型阳性菌株及51株ESBLs表型阴性多重耐药菌株中扩增出除OXA-2外共8种耐药基因型并经测序证实.线性检测范围3×10~3～3×10~8拷贝/mL , r ＝ -0.994 7 ;批间重复性试验变异系数(CV)为9.6%.荧光定量PCR方法与改良三维实验方法比较差异无统计学意义( χ2 = 1.125,P > 0.05).结论:SYBR GREEN Ⅰ实时荧光定量PCR检测ESBLs的耐药基因具有特异性强、灵敏度高、快速、简便的特点,适于临床监测革兰阴性杆菌产ESBLs 基因型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘蕊	天津市人民医院检验学部	60	273	9.0	11.0
2	樊琳	天津市人民医院检验学部	4	19	2.0	4.0
3	刘慧敏	天津市人民医院检验学部	6	32	4.0	5.0
4	穆小燕	天津市人民医院检验学部	4	18	3.0	4.0
5	王晨	天津市人民医院检验学部	1	0	0.0	0.0