实时荧光定量PCR检测沙门菌flor基因和sul2基因方法的建立

• 作者: 刘军军 刘宗梁 孙裴 曹堃 李郁 王元兰 魏建忠
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 沙门菌 实时荧光定量PCR flor基因 sul2基因
• 年，卷（期）: 2015,（7）
• 所属期刊栏目: 药理与临床
• 页码范围: 531-537
• 页数: 7页
• 分类号: R378
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种flor基因和sul2基因的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,为检测沙门菌的耐药性以及耐药基因分子流行病学调查奠定基础.方法 以氟苯尼考、复方磺胺甲噁唑抗性的沙门菌菌株为材料,根据GenBank中登陆的沙门菌flor和sul2基因序列,设计并合成引物,建立基于SYBR Green Ⅰ染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其溶解曲线进行分析.结果 以pMD 18-T为载体构建的标准品的Ct值与样品的浓度的对数在一定范围内呈现良好的线性关系,两基因的检测域值较小,flor基因可以检测到102 copies/μL的样品,sul2基因可以检测到103 copies/μL的样品,经耐药性与基因表达量相关分析,耐药性较高的菌株其flor基因、sul2基因表达量也较高.结论 建立的检测沙门菌中flor因和sul2基因的荧光定量PCR方法具有很好的灵敏性、特异性和重复性,可以广泛用于临床中lor和sul2两种基因的检测以及沙门菌耐药分子流行病学的调查.