烟草Nt-syr1基因实时荧光定量PCR检测方法

• 作者: 代晓燕 苏以荣 范业宽 贾志红 邹焱 陈风雷 魏文学 龙文
• 来源期刊: 中国烟草科学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 烟草 Nt-syr1 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 20-24,28
• 页数: 6页
• 分类号: TS411
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5119.2008.03.005

摘要

根据烟草Nt-syr1基因mRNA序列设计特异弓I物,建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR反应体系,对烟株打顶后叶片Nt-syrl基因进行了mRNA转录水平上的定量分析,为从分子生物学水平上研究烤烟钾素营养调控机理提供新的技术手段.该方法简单实用,获得的荧光定量PCR扩增曲线基线平整,指数区扩增明显,斜率大;稳定性和重现性好,变异系数小;循环阈值Ct与PCR起始模板量的对数值之问存在良好的线性关系.对基因表达结果分析表明,烟株打顶后1 h,Nt-syrl基因在叶片中强烈表达,表达量约是同期不打顶处理的480倍,随后逐渐降低.与打顶处理相比,打顶后涂抹生长调节剂可以降低其表达量.