不同浓度Cd2+胁迫下烟草实时荧光定量PCR内参基因的筛选

• 作者: 刘汉阳 张龙 池俊玲 赵一博 辛翠花 郭江波
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 烟草 镉胁迫 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) 内参基因 筛选
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 烟草科学
• 页码范围: 2133-2140
• 页数: 8页
• 分类号: S572
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1191.2019.10.01

摘要

[目的]筛选出镉(Cd)胁迫下烟草的最佳内参基因,为后续研究与Cd2+相关的功能性基因提供理论依据.[方法]分别以0、250和500 mg/L氯化镉(CdCl2)溶液对本生烟草进行胁迫处理,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同浓度Cd2+胁迫处理下肌动蛋白基因(ACT)、微管蛋白基因(TUB)、蛋白磷酸酶2基因(PP2A)、18S rRNA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAPDH)及转录延伸因子基因(EF1a)6个候选内参基因的表达情况,并利用geNorm和Norm-Finder综合评价Ct各内参基因表达的稳定性.[结果]以不同浓度Cd2+胁迫处理的本生烟草cDNA为模板均可PCR扩增出ACT、TUB、18S rRNA、PP2A、GAPDH和EF1a等6个内参基因.6个内参基因的qRT-PCR扩增曲线走势正常,平行性好,无引物二聚体和非特异性条带产生,且绘制的标准曲线上各点基本分布在一条直线上,扩增效率在要求范围(90.00％～105.00％)之内,符合下一步评价要求,且斜率的回归系数(R2)>0.9800,说明线性关系较好.GAPDH和EF1a基因的表达丰度较高,18S rRNA处于中等水平,ACT、TUB和PP2A基因的表达丰度较低.geNorm分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>GAPDH基因>ACT基因>TUB基因>PP2A基因>18S rRNA;Norm-Finder分析结果显示,6个内参基因的表达稳定性排序为EF1a基因>TUB基因>GAPDH基因=PP2A基因>ACT基因>18S rRNA.[结论]EF1a基因在不同浓度Cd2+胁迫处理下表达水平较高,稳定性最好,可作为Cd胁迫下本生烟草的最佳内参基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	辛翠花	内蒙古科技大学生命科学与技术学院	13	52	4.0	6.0
2	郭江波	内蒙古科技大学生命科学与技术学院	18	62	5.0	7.0
3	赵一博	内蒙古科技大学生命科学与技术学院	4	17	2.0	4.0
4	池俊玲	内蒙古科技大学生命科学与技术学院	4	7	2.0	2.0
5	张龙	内蒙古科技大学生命科学与技术学院	1	2	1.0	1.0
6	刘汉阳	内蒙古科技大学生命科学与技术学院	1	2	1.0	1.0