靶向 caspase-8小发夹 RNA 减轻去血清／缺氧诱导的人骨髓间充质干细胞凋亡

• 作者: 刘晓颖 单志新 朱杰宁 李晓红 林秋雄 符永恒 袁伟伟 谭虹虹 邓春玉
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 细胞凋亡 小发夹RNA
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1172-1178
• 页数: 7页
• 分类号: R363
• 字数: 4644字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.07.004

摘要

目的：研究caspase-8小发夹RNA（Cap8 shRNA）对人骨髓间充质干细胞（hMSCs）凋亡的调控作用。方法：构建2个靶向人caspase-8基因的穿梭质粒pAd-Cap8 shRNA，并鉴定可有效抑制人HEK293细胞中caspase-8表达的pAd-Cap8 shRNA质粒。构建表达Cap8 shRNA的重组腺病毒质粒，并在HEK293细胞中包装、扩增重组腺病毒rAd-Cap8 shRNA。检测rAd-Cap8 shRNA感染的hMSCs中caspase-8 mRNA和蛋白表达。利用anne-xin V/PI双染色法和caspase-8活性检测分析去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡变化，利用荧光定量PCR检测hMSCs中VEGF、肝细胞生长因子1（HGF）、胰岛素样生长因子（IGF-1）、Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达。结果：通过定量PCR筛选到可有效抑制caspase-8表达的pAd-Cap8 shRNA质粒。成功构建Cap8 shRNA的重组腺病毒质粒，并包装、扩增重组腺病毒rAd-Cap8 shRNA。荧光定量PCR和Western blotting结果证实rAd-Cap8 shRNA可有效抑制hMSCs中caspase-8表达。 rAd-Cap8 shRNA能有效抑制去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡，降低caspase-8活性，增强hMSCs中HGF、IGF-1和Bcl-2表达。结论：Caspase-8 shRNA可以抑制去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡。