RNA干扰caspase-8基因及抑制细胞凋亡的作用

• 作者: 张伟杰 张艳 朱珉 陈刚 陈实 陈栋
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因沉默 细胞凋亡 短发夹状RNA Caspase-8
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 338-341
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 4920字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2008.03.005

摘要

目的:探讨RNA干扰caspase-8基因及抑制细胞凋亡的作用效果.方法:构建针对大鼠caspase-8基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒pRNAT-U6.1-caspase-8 shRNA,采用电穿孔的方法转染RK3E细胞,经G418筛选后,形成稳定表达caspase-8 shRNA的细胞系.实验分为3组,(1)正常对照组,未转染的RK3E细胞;(2)阴性对照组,转染空载体pRNAT-U 6.1的RK3E细胞系;(3)实验组,转染caspase-8 shRNA的RK3E细胞系.经脂多糖孵育12 h后,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,RT-PCR和Real time PCR检测mRNA的表达,以及各组caspase-8蛋白的活性.结果:与正常对照组和阴性对照组相比,实验组的细胞凋亡率显著降低(P＜0.01),caspase-8的mRNA水平和蛋白活性显著降低(P＜0.01).结论:针对caspase-8的特异性shRNA可以明显引起靶基因的沉默,进而抑制细胞凋亡的发生.