秀丽隐杆线虫NDX-4蛋白的体外表达及酶学活性研究

• 作者: 史飞 周晓阳 干伟 徐新民 蔡剑平 郭娇 钱建畅
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: NDX-4 HPLC-UV 8-oxodGTP 8-oxoGTP 酶活性
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: R38
• 字数: 3133字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建秀丽隐杆线虫NDX-4基因的克隆载体和表达载体,诱导NDX-4蛋白表达,研究NDX-4的体外酶学活性.方法 构建NDX-4的克隆载体,将NDX-4的开放阅读框架(ORF)插入PGEM-T载体中扩增;采用双酶切将NDX-4ORF连入表达载体pET-30a(+)中;将连接质粒转入BL21(DE3)感受态细胞后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对NDX-4蛋白进行表达诱导,并进行树脂纯化;用SDS-PAGE和Western blot检测以评价NDX-4体外表达和纯化的质量;采用高效液相色谱-紫外检测技术(HPLC-UV)检测NDX-4蛋白水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的活性.结果 SDS-PAGE和Western blot 检测均在经IPTG诱导的蛋白提纯物泳道上出现单一条带,分子质量约为24kDa,而未诱导的和空载体均未见条带.HPLC-UV检测结果显示加入NDX-4蛋白的8-oxodGTP和8-oxoGTP均被水解为相应的单磷酸和二磷酸氧化核苷,并且随着蛋白量的增加,两种产物的量逐渐增多.结论 秀丽隐杆线虫的NDX-4蛋白具有水解8-oxodGTP和8-oxoGTP的双重功能,可能对抑制DNA和RNA的氧化损伤具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周晓阳	卫生部北京医院、卫生部北京老年医学研究所、卫生部老年医学重点实验室	7	20	3.0	4.0
2	徐新民	首都医科大学附属北京地坛医院检验科	26	115	6.0	9.0
3	干伟	卫生部北京医院、卫生部北京老年医学研究所、卫生部老年医学重点实验室	1	0	0.0	0.0
4	史飞	卫生部北京医院、卫生部北京老年医学研究所、卫生部老年医学重点实验室	1	0	0.0	0.0
5	钱建畅	卫生部北京医院、卫生部北京老年医学研究所、卫生部老年医学重点实验室	1	0	0.0	0.0