siRNA特异性沉默HIF-1α对缺氧培养的OCM-1细胞中Vimentin表达的影响

• 作者: 卢发艳 周占宇 王爽 苑伏香 赵娟
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 关键词: 葡萄膜黑色素瘤 缺氧诱导因子-1α 波形蛋白 上皮-间质转化 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 瞯实验论著瞯
• 页码范围: 411-415
• 页数: 5页
• 字数: 5187字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3980/j.issn.1672-5123.2014.03.08

摘要

目的：研究小干扰RNA （ siRNA ）特异性沉默缺氧诱导因子-1α（ HIF-1α）对缺氧状态下人眼葡萄膜黑色瘤OCM-1细胞中波形蛋白（Vimentin）表达的影响，初步探讨HIF-1α对葡萄膜黑色瘤上皮-间质转化（ EMT ）的调控作用。<br>　　方法：体外常氧培养及缺氧培养OCM-1细胞。其中，缺氧培养是通过在培养基中加入浓度为100μmol/L的氯化钴（ CoCl 2）模拟肿瘤内部缺氧微环境，并将缺氧培养细胞分为单纯缺氧组、HIF-1α干扰组、β-actin阳性对照组、无义寡核苷酸阴性对照组及空载脂质体对照组。体外设计合成siRNA（包括HIF-1α-siRNA、β-actin-siRNA及阴性对照），以Lipofectamine TM 2000为载体介导siRNA转染缺氧培养的OCM-1细胞，以RT-PCR和Western blot检测缺氧培养前后及转染前后HIF-1α、Vimentin基因和蛋白的表达。<br>　　结果：单纯缺氧组与常氧组相比，HIF-1αmRNA表达无明显差异（ P＞0．05），蛋白表达显著升高（ P＜0．01），而Vimentin mRNA和蛋白的表达均显著升高（ P＜0．01）。缺氧培养的各组之间相比，阳性对照组β-actin mRNA表达下降（ P＜0．01），证实转染成功；干扰组HIF-1α、Vimentin mRNA和蛋白表达均明显下降（ P＜0．01），阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别（P＞0．05）。<br>　　结论：缺氧可促使OCM-1细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高，并可通过转录激活下游靶基因 Vimentin，使其在mRNA和蛋白水平表达均升高，提示HIF-1α可能参与调控葡萄膜黑色瘤的EMT ，进而促进肿瘤侵袭、转移；HIF-1α-siRNA转染OCM-1细胞可成功下调HIF-1α及Vimentin的表达，说明从分子水平抑制HIF-1α的表达，可能抑制肿瘤侵袭、转移，从而为肿瘤治疗提供新方向。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周占宇	青岛大学附属医院眼科	45	155	6.0	10.0
2	赵娟	青岛大学附属医院眼科	15	37	3.0	5.0
3	卢发艳	青岛大学附属医院眼科	2	3	1.0	1.0
4	王爽	青岛大学附属医院眼科	8	12	3.0	3.0
5	苑伏香	青岛大学附属医院眼科	4	1	1.0	1.0