血小板源性生长因子B基因转染抑制缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡

• 作者: 刘芬 杨毅宁 陈小翠 陈邦党 马依彤 马翔
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 组织工程 血小板源性生长因子B 9型腺相关病毒 基因转染 心肌细胞 缺血缺氧 细胞凋亡 转染效率 血管新生 BAX Caspase-3 国家自然科学基金
• 年，卷（期）: 2014,（38）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 组织构建细胞学实验
• 页码范围: 6090-6098
• 页数: 9页
• 分类号: R318
• 字数: 9263字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.38.005

摘要

背景：血小板源性生长因子B(platelet-derived growth factor-B，PDGF-B)是一种有效的促血管生长因子，9型腺相关病毒(adeno-associated virus serotype，rAAV9)对心肌细胞具有良好的靶向亲和力，是目前缺血性心脏疾病基因治疗的理想载体。<br>　　目的：探索rAAV9介导PDGF-B基因(rAAV9-PDGF-B)体外转染乳鼠心肌细胞，抵抗缺血缺氧诱导心肌细胞凋亡的作用。<br>　　方法：分离培养原代乳鼠心肌细胞，分别将感染复数为1×105，1×106及1×107 MOI携带rAAV9-PDGF-B基因的重组9型腺相关病毒及空病毒(rAAV9-eGFP)转染乳鼠心肌细胞，逐日在荧光显微镜下观察eGFP的阳性表达，采用流式细胞仪测定rAAV9载体的转染效率，Western blot和免疫荧光鉴定PDGF-B蛋白表达情况；并于rAAV9-eGFP及rAAV9-PDGF-B(107感染复数)转染第5天时，建立体外心肌细胞缺血缺氧损伤模型，通过 TUNEL法检测心肌细胞凋亡数目，Western Blot 检测 Bax及 Caspase-3凋亡相关蛋白的表达，研究PDGF-B基因过表达抗心肌细胞凋亡的作用及可能机制。<br>　　结果与结论：rAAV9载体可有效转染乳鼠心肌细胞，eGFP和PDGF-B蛋白可在心肌细胞中高效正确表达，其表达强度随着转染时间和转染复数的增加而逐渐增强，第5天趋于稳定，此时各组转染率相比差异均有显著性意义(P<0.01)。rAAV9-PDGF-B组心肌细胞凋亡率低于rAAV9-eGFP组(P<0.05)，且rAAV9-PDGF-B组凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3的表达与rAAV9-eGFP组比均显著下调(P <0.05)。结果表明，PDGF-B基因过表达可有效减轻缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡，其机制通过抑制Bax和Caspase-3蛋白表达而发挥作用，为rAAV9-PDGF-B载体用于缺血性心脏疾病的基因治疗提供依据。