抗酸染色阳性痰涂片刮削物扩增分枝杆菌rpoB基因的初步探索

• 作者: 刘志辉 孟繁荣 牛群 童莉 谭守勇 雷杰 饶运帷 高俊文
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: 结核 痰涂片 rpoB基因 PCR
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 检验与临床
• 页码范围: 1811-1814
• 页数: 4页
• 字数: 3624字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2014.11.043

摘要

目的：探讨直接从抗酸染色阳性痰涂片刮削物中扩增分枝杆菌rpoB基因的方法。方法：（1）使用引物Primer1：5′-CGTACGGTCGGCGAGCTGATC-3′，与Primer2：5′-AGGGGTTTCGATC GGGCACATC-3′；Primer3：5′-TGTTCTTCAAGGAGAAGCG-3′，与Primer4：5′-TCGTCGGCGGTCAGGTA-3′分别扩增18株临床分离结核分枝杆菌的rpoB基因，以检测引物设计的合理性。（2）分别采用普通PCR、Touchdown PCR、巢式PCR、二次PCR对直接从3＋～4＋抗酸染色痰涂片刮削物中提取的80例分枝杆菌基因组DNA进行rpoB基因扩增。（3）对80例抗酸染色痰涂片刮削物基因组DNA行实时荧光定量PCR以检测其拷贝数。（4）对18例临床分离菌株基因组DNA 100、101、102、103、104、105、106、107倍稀释物行实时荧光定量PCR与普通PCR （Primer1与Primer2，Primer3与Primer4），以比较二者检出限。结果：（1）两对引物对18株临床分离结核杆菌rpoB基因扩增均有明亮目的条带，并经测序证实。（2）80例痰涂片刮削物基因组DNA扩增均未见目的条带。（3）80例痰涂片刮削物基因组中，其中20例DNA的拷贝数为102～103 copies/μL，60例DNA的拷贝数为104～105 copies/μL。（4）两组引物能够扩增出rpoB基因的最高稀释倍数分别为104、103倍，其对应的荧光定量PCR检测拷贝数分别为106 copies/μL、107 copies/μL。结论：从抗酸染色阳性痰涂片刮削物中扩增分枝杆菌rpoB基因理论上可行，但在实际操作中尚存在一些问题有待进一步探索。抗酸染色涂片制作过程对基因提取及扩增的影响，痰涂片刮屑物基因组提取过程中多次离心造成的DNA量部分丢失均可能是本实验失败需要考虑的因素之一。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童莉		2	12	2.0	2.0
2	孟繁荣	国家呼吸重点实验室广州市胸科医院结核科	1	3	1.0	1.0
3	刘志辉	国家呼吸重点实验室广州市胸科医院结核科	1	3	1.0	1.0
4	饶运帷	国家呼吸重点实验室广州市胸科医院结核科	1	3	1.0	1.0
5	高俊文	国家呼吸重点实验室广州市胸科医院结核科	1	3	1.0	1.0
6	牛群	国家呼吸重点实验室广州市胸科医院结核科	1	3	1.0	1.0
7	雷杰	国家呼吸重点实验室广州市胸科医院结核科	1	3	1.0	1.0
8	谭守勇		1	3	1.0	1.0