人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒-Gn蛋白重组抗体的研究

• 作者: 仇佩虹 刘林 刘洋 孙丽娜 李川 梁米芳 陈素华
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 重组抗体 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

为研制人源抗发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)Gn蛋白重组抗体,本研究利用噬菌体表面展示技术,以SFTSV全病毒颗粒和重组表达SFTSV-Gn蛋白为抗原,从人源抗SFTSV Fab噬菌体抗体库中筛选抗SFTSV-Gn蛋白的重组Fab抗体,通过ELISA对Fab抗体的结合特异性进行检测.将Fab抗体基因克隆入哺乳动物细胞表达载体HL51-14,瞬时转染293T细胞获得分泌表达的IgG抗体.通过ELISA、IFA和Western-blotting检测IgG抗体的结合特异性.采用亲和层析纯化IgG抗体,并用微量中和试验检测IgG抗体的中和活性.结果表明经过三轮富集筛选,以SFTSV病毒颗粒为抗原筛选出364株针对SFTS病毒核蛋白Fab抗体,没有筛选出特异性结合Gn蛋白的阳性克隆,而通过Gn蛋白筛选得到8株特异结合Gn蛋白的Fab抗体,其中5株来自Lambda库,3株来自Kappa库.ELISA、IFA和Western-blotting检测证实这8株IgG抗体均能特异性结合Gn蛋白.微量中和试验显示8株新筛抗体没有中和活性,但仍可为后续SFTSV人源单克隆抗体的研究提供借鉴和参考.