去泛素酶复合体Ubp3/Bre5的制备及与Cdc48作用

• 作者: 吕操 夏立新 张洁 时丽丽 景晓飞 王鹏举 盖园明 秦刚 苏文成 谭焕波 邹培建
• 来源期刊: 深圳大学学报（理工版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 结合蛋白质 Ubp3去泛素化酶 结合辅因子Bre5 ATP酶Cdc48 去泛素化复合体 与谷光苷肽巯基转移酶沉淀试验 直接相互作用
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 【生物工程】
• 页码范围: 58-67
• 页数: 10页
• 分类号: Q513
• 字数: 1215字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1249.2015.01058

摘要

泛素化是一种存在于真核细胞中与生理功能密切相关的蛋白修饰，泛素化与去泛素化处于动态调节过程中。 Ubp3是与人USP10同源的酵母去泛素化酶，结合辅引子Bre5在细胞内发挥广泛作用。为研究该复合体的工作机制，制备重组蛋白复合体，在大肠杆菌中成功表达并纯化重组Ubp3与Bre5单体及Ubp3/Bre5复合体，首次成功大规模制备重组Ubp3/Bre5复合体。通过一系列pulldown实验，检验Ubp3/Bre5与AAA家族中泛素选择性ATP酶Cdc48的相互作用模式，结果发现， Ubp3及Bre5无法单独与Cdc48结合，但Ubp3/Bre5复合体可以有效与Cdc48相互作用。提出了Ubp3/Bre5-Cdc48相互作用的新模式，制备了高质量重组Ubp3/Bre5复合体。该研究为通过生化及结构生物学进行分子机制探索奠定了基础。