融合蛋白CTP-FoxM1诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞的活化

• 作者: 唐翌姝 张莉萍 王海霞 郑兰
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 胞质转导肽 原核表达 蛋白纯化 树突状细胞 疫苗 肿瘤免疫
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 638-647
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2015.05.0012

摘要

树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗负载的肿瘤抗原可以使DCs大量表达表面分子Ⅱ类组织相容性抗原(major histocompatibility complex class-Ⅱ,MHC-Ⅱ)及共刺激分子CD40、CD80、CD86,促进Th1(T helper 1)型细胞因子的分泌,从而可以将肿瘤抗原充分递呈给T淋巴细胞,诱导机体产生杀伤肿瘤细胞的免疫应答.其中,肿瘤抗原是否能充分活化DCs是机体发挥抗肿瘤免疫应答的关键.该研究以融合蛋白CTP-FoxM1(cytoplasmic transduction peptide-forkhead box M1)为研究对象,探讨其对C57BL/6小鼠骨髓来源DCs的活化作用.首先,分别将胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)、FoxM1 (forkhead box M1)抗原相关基因连接入pCOLD-TF-DNA,构建重组原核表达质粒pCOLD-TF-CTP-FoxM1,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG(isopropy1β-D-1-thiogalactopyranoside)诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证得到融合蛋白CTP-FoxM1.然后,用CCK-8试剂盒检测经不同浓度的融合蛋白CTP-FoxM1处理48 h后的DCs的存活率;用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白CTP-FoxM1在DCs的定位情况;流式细胞仪检测DCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达情况;ELISA法检测DCs培养上清中细胞因子白介素-12(interleukin-12,IL-12)的分泌水平.结果显示:CTP-FoxM1对DCs的生长有一定的抑制作用,且与其浓度有关,浓度为1 μg/mL的融合蛋白CTP-FoxM1处理组的DCs存活率(80.93％±8.36％)明显高于浓度为2 μg/mL融合蛋白CTP-FoxM1处理组DCs的存活率(70.13％±5.38％,P＜0.001)和4μg/mL融合蛋白CTP-FoxM1处理组DCs的存活率(62.97％±4.06％,P＜0.001).在激光共聚焦显微镜下可以观察到该融合蛋白能够在DCs胞质内定位,与对照组相比,该融合蛋白可以上调DCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达量(P＜0.01,P＜0.05)及细胞因子IL-12的分泌量(P＜0.001).结果提示,融合蛋白CTP-FoxM1能促进DCs的活化,对肝癌的免疫治疗有一定的潜能,为下一步探索融合蛋白CTP-FoxM1负载的DCs是否能够在体内发挥免疫效应奠定了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张莉萍		158	1339	18.0	27.0
2	郑兰		2	10	1.0	2.0
3	王海霞		6	16	2.0	4.0
4	唐翌姝		3	4	1.0	2.0