一株大肠埃希菌烈性噬菌体ΦTRI-1的分离及特性分析?

• 作者: 刘伟 刘旭 孙航军 杨金广 王凤龙 高苗
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Escherichia coli 噬菌体 分离 烈性 生物学特性
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 页码范围: 535-542
• 页数: 8页
• 分类号: R378.21
• 字数: 6420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13327/j.jjlau.2015.2409

摘要

通过在E． coli菌液中加入土壤悬浮液共培养获得噬菌体，利用双层平板法反复纯化4次后得到单一清晰的噬菌斑。将单个噬菌斑加入对数早期的E． coli菌液中增殖培养后利用核酸抽提试剂盒提取总核酸，并分别用DNaseⅠ和RNaseA对总核酸进行消化，利用限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ对其进行酶切；增殖后的噬菌体液进行噬菌体颗粒浓缩，取浓缩液负染后置于电子显微镜下确定噬菌体的形态特征，并进行SDS－PAGE电泳分析，确定其蛋白条带；同时测定其他生物学特性，包括滴度、最佳感染复数、一步生长曲线以及其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性等。结果表明：分离并纯化出1株E． coli烈性噬菌体，命名为ΦTRI?1，形态特征：头部为二十面体的立体对称，直径约为60 nm，有一长尾，长约200 nm；其核酸属于双链DNA，按照国际病毒分类委员会分类标准，其属于有尾噬菌体目（ Caudovirales），长尾噬菌体科（ Siphoviridae）的烈性噬菌体。生物学特性测定结果显示ΦTRI?1对E． coli的最佳感染复数为0?1，潜伏期约为20 min，爆发期约为60 min，裂解量约为38；ΦTRI?1在40℃时活性最高，在20～70℃活性均较强，80℃时活性丧失；其酸碱耐受力较强，在偏碱环境下活性相对更高；对紫外线有一定的耐受能力；对氯仿敏感，浓度5％的氯仿即可致其失活。分离到的噬菌体属于有尾噬菌体目，长尾噬菌体科，综合其各项生物学特性可知其潜伏期短，裂解能力强，环境适应能力强，具有很好的杀菌效果，具有开发为抗E． coli菌剂的潜力。