Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响

• 作者: 姚琴 谢柏臻 赵慧毅
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 关键词: 骨肉瘤 HSP70热休克蛋白质类 细胞凋亡 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 骨肿瘤
• 页码范围: 165-173
• 页数: 9页
• 字数: 7043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2015.02.010

摘要

目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70.重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆.荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Eznn和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对靶肿瘤细胞的杀伤作用.结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体.较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01％±0.22％上升至24.28％±0.50％,增殖速度则自395.14％±2.24％减少至310.00％±2.83％.另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达.而Ezrin-shRNMHSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果.MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33％±1.95％.结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵慧毅	厦门大学附属中山医院脊柱外科	24	165	8.0	12.0
2	谢柏臻	厦门大学附属中山医院脊柱外科	10	37	3.0	6.0