ARM结构的缺失对SPAG6在哺乳细胞中定位的影响

• 作者: 张志兵 张玲 李红飞 汪智琼 石玉琴
• 来源期刊: 中国男科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 精子相关抗原6基因 ARM结构域 不育,男性
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3-8
• 页数: 6页
• 分类号: R698.2|R394.33
• 字数: 4106字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0848.2015.01.001

摘要

目的 本研究构建精子相关抗原6 (SPAG6)基因全长及6个不同长短ARM序列的真核表达载体pEGFP-N2-SPAG6-△ARM,并使其在CHO细胞中表达,观察全长及6个ARM结构缺失后对真核细胞CHO细胞中SPAG6蛋白定位的影响.方法 利用NCBI数据库,寻找小鼠SPAG6蛋白的保守功能区,分析全长蛋白序列,检索出SPAG6有7个ARM区域.利用PCR技术扩增出6个缺失不同ARM结构的SPAG6 cDNA,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白基因的pEGFP-N2真核表达载体中,对阳性克隆进行酶切和测序鉴定,将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,分别提取细胞蛋白进行Western blot检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察7个不同SPAG6/GFP融合蛋白在CHO细胞内的定位.结果 酶切和测序鉴定表明,全长及6个缺失不同长短ARM结构的真核表达质粒构建成功,转染实验发现重组质粒均能够在CHO细胞中表达,但仅全长表达产物定位于微管,缺失任何一个ARM区域都可影响在细胞中的微管定位.结论 SPAG6在哺乳动物细胞内的正确定位依赖于全长.该研究为进一步研究SPAG6蛋白的结构与功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玲	武汉科技大学医学院公共卫生学院	70	310	10.0	15.0
2	石玉琴	武汉科技大学医学院公共卫生学院	29	94	4.0	9.0
3	汪智琼	武汉科技大学医学院公共卫生学院	4	5	2.0	2.0
5	李红飞	武汉科技大学医学院公共卫生学院	4	3	1.0	1.0