PAM14缺失突变体在哺乳动物细胞中的表达和定位

• 作者: 刘晓颖 朱恒锐 杨军 汪云飞 范礼斌 陈应炉
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 转染 印迹法,蛋白质 核蛋白类
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 116-119
• 分类号: R341|R394.2
• 字数: 3242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2011.02.004

摘要

目的 构建带HA标签(标签序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇)的PAM14缺失突变体PAM14-N和PAM14-C的真核表达载体,将其分别转染至COS7细胞中观察PAM14-N和PAM14-C蛋白在细胞内的定位,并转染至HEK293T细胞检测其是否表达.方法 以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板,PCR法扩增PAM14-N-HA,BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入真核表达载体pCDNA3.1中,同理构建pCDNA3.1-HA-PAM14-C,将重组表达质粒pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C分别转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位.转染至HEK293T细胞,提取总蛋白,进行Western blot检测.结果 经测序鉴定,成功构建了真核表达载体 pCDNA3.1-PAM14-N-HA和pCDNA3.1-HA-PAM14-C,转染后荧光显微镜观察PAM14-N在COS7细胞中主要定位于细胞核,PAM14-C定位不明显;经Western blot检测PAM14-N在HEK293T细胞中能够有效表达,PAM14-C无表达.结论 实验结果确定了PAM14功能最小区域及PAM14-N的定位和表达,为进一步了解PAM14的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生物学教研室	53	174	8.0	9.0
2	陈应炉	安徽医科大学生物学教研室	4	11	2.0	3.0
3	刘晓颖	安徽医科大学生物学教研室	57	121	6.0	8.0
4	汪云飞	安徽医科大学生物学教研室	5	1	1.0	1.0
5	朱恒锐	安徽医科大学生物学教研室	5	1	1.0	1.0
6	杨军	安徽医科大学生物学教研室	9	94	3.0	9.0