RACK1突变体在哺乳动物细胞中的表达及定位研究

• 作者: 刘晓颖 朱亮亮 潘林鑫 王蓓华 耿慧武 范礼斌 韩卢
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 突变体 质粒构建 免疫荧光 Western blot 结构域
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1595-1599
• 页数: 5页
• 分类号: Q28|R392.7
• 字数: 3537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.11.009

摘要

目的：根据活化蛋白激酶C受体1( RACK1)的蛋白结构，构建其缺失突变体的真核表达质粒，研究RACK1缺失突变体在真核细胞内的表达及定位改变。方法根据RACK1蛋白的结构域特点，以 pcDNA3．1-RACK1-FLAG 为模板，构建真核表达质粒pcDNA3．1-RACK1(51-317)-FLAG、pcDNA3．1-RACK1(93-317)-FLAG、pcDNA3．1-RACK1(135-317)-FLAG、pcDNA3．1-RACK1(180-317)-FLAG、pcDNA3．1-RACK1(219-317)-FLAG；Western blot检测上述重组质粒在HEK 293T细胞中的表达；免疫荧光技术检测RACK1的各缺失突变体在COS7细胞中的定位情况。结果成功构建了RACK1各缺失突变体的真核表达质粒；Western blot结果表明，除pcDNA3．1-RACK1(219-317)-FLAG外，其余缺失突变体在 HEK 293T 细胞中均有效表达；免疫荧光实验表明RACK1缺失突变体在COS7细胞中主要定位在胞质，细胞核中也有少量分布。结论成功构建了RACK1缺失突变体真核表达质粒，并在 HEK 293T和 COS7细胞中成功表达；在COS7细胞中不同缺失突变体的表达定位均有差异，与野生型的RACK1相比也有所不同，表明缺失不同的结构域后其在细胞中的定位表达也发生了改变。这为研究RACK1各结构域的功能提供了重要依据。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范礼斌	安徽医科大学生命科学学院生物学系	53	174	8.0	9.0
2	耿慧武	安徽医科大学生命科学学院生物学系	17	37	3.0	5.0
3	刘晓颖	安徽医科大学生命科学学院生物学系	57	121	6.0	8.0
4	潘林鑫	安徽医科大学生命科学学院生物学系	19	40	3.0	5.0
5	朱亮亮	安徽医科大学生命科学学院生物学系	3	1	1.0	1.0
6	韩卢	安徽医科大学生命科学学院生物学系	1	0	0.0	0.0
7	王蓓华	安徽医科大学生命科学学院生物学系	3	3	1.0	1.0