人乳头瘤病毒6型全基因转染hTERT细胞

• 作者: 严翘 余卫平 单莹 张红叶 潘永正 王飞 董正邦 郭宗科 陈梅
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒6 基因 转染
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 443-446
• 页数: 4页
• 分类号: R752
• 语种: 中文
• DOI: 10.13735/j.cjdv.1001-7089.201410028

摘要

目的 探讨共转染与筛选技术获得稳定携带有HPV6全基因细胞的可能性,为HPV6全基因体外培养模型的建立奠定基础.方法 质粒pEGFP-1用限制性内切酶切下EGFP段,凝胶电泳,纯化取掉EGFP段的DNA片段,T4DNA连接酶进行线状DNA的自身环化,转染DH5a细胞,抗生素筛选,获去掉EGFP片段的新质粒pEGFP-△EGFP,多组内切酶酶切鉴定.限制性内切酶切下质粒pSP65-HPV6的HPV6全长基因,纯化后获HPV6全长线性基因.将线性HPV6基因和质粒pEGFP-△EGFP电转法共转染hTERT细胞,抗生素筛选、传代,Southern blot方法检测细胞内HPV6 DNA.结果 HPV6基因组DNA转至hTERT细胞,经G418筛选1d,培养皿内可见对G418抗性的阳性细胞克隆出现,其形态与普通hTERT细胞相似.用Southern blot检测细胞内HPV 11基因组的存在,传3代后,细胞内依然检测到HPV6 DNA存在.结论 HPV6基因组DNA可通过电转法成功导入hTERT细胞内,通过筛选可获得阳性细胞,HPV6 DNA在细胞内可保持3代以上.