IL-18的毕赤酵母表达及其激活 NF-κB 和 p38途径促进 BRL-3A 细胞增殖

• 作者: 张继红 徐存拴 杨刚刚 许晓亚 马诚凯
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 白细胞介素 18 毕赤酵母 双水相萃取 细胞增殖 信号通路
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 医学
• 页码范围: 458-466
• 页数: 9页
• 分类号: Q291
• 字数: 5808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11778/j.jdxb.2015.06.004

摘要

目的：探讨白细胞介素18（IL-18）在毕赤酵母中的表达条件及其对 BRL-3A 细胞的增殖作用和作用机制．方法：构建表达载体 pPIC9K-IL-18，电转化至毕赤酵母 GS115，PCR、Western blotting 和 SDS-PAGE 方法鉴定表达产物的正确性，并对发酵条件进行优化，再经双水相萃取偶联 DEAE 离子交换层析分离纯化表达产物．然后，MTT法检测重组大鼠 IL-18（rrIL-18）对 BRL-3A 细胞的增殖作用，RT-PCR 和 Western blotting 方法检测 IL-18信号通路相关基因的表达变化．结果：在3 L 发酵罐规模下600的菌体密度、pH ＝6.0、诱导温度23℃、体积分数分别为20％DO 和0.25％甲醇浓度条件下表达质量浓度最高约为280 mg／L，经分离纯化后纯度可达95％．此外，质量浓度为15～20 ng／mL rrIL-18孵育48 h，能明显促进 BRL-3A 细胞增殖（P ＜0.5），且 IL18R、MyD88、NF-κB 及其下游靶蛋白cyclin B1和 cyclin B2的表达量均显著高于对照组（P ＜0.5）．同时，p38途径的 ATF2及其下游靶蛋白 cyclin A2和Bcl-2的表达量也随之升高（P ＜0.5）．结论：成功构建大鼠 IL-18表达载体，优化在毕赤酵母中的发酵条件和纯化工艺，并首次证实 IL-18能通过 NF-κB 和 p38／ATF2途径激活细胞增殖相关靶蛋白 cyclin B1、cyclin B2、cyclin A2和Bcl-2，进而促进 BRL-3A 大鼠肝细胞增殖．

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张继红	新乡医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室	4	7	1.0	2.0
5	许晓亚		1	1	1.0	1.0
6	杨刚刚		1	1	1.0	1.0
7	马诚凯		1	1	1.0	1.0
8	徐存拴		3	6	1.0	2.0