牦牛HSP27基因的克隆及其在雌性生殖器官中的表达

• 作者: 何翃闳 余四九 刘鹏刚 崔燕 张译夫 李秦 樊江峰 潘阳阳 胡威
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 牦牛 HSP27 基因克隆 生物信息学 表达
• 年，卷（期）: 2015,（20）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 4178-4187
• 页数: 10页
• 字数: 6500字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.20.017

摘要

【目的】克隆牦牛热休克蛋白27(heat shock proteins27，HSP27)基因，分析其生物学特性，研究正常生理条件下HSP27基因在母牦牛主要生殖器官中的表达差异。【方法】采取卵泡期后期、黄体期后期同侧的卵巢、输卵管和子宫，以及妊娠期早期（胚胎约长2.3cm）妊娠侧的卵巢、输卵管和子宫组织，以其cDNA为模板，利用RT-PCR扩增牦牛HSP27基因，并将纯化的PCR产物克隆到pMDTM18-T Vector 载体中进行测序；利用生物信息学软件对HSP27基因的特征进行生物信息学分析，预测功能结构域；采用实时荧光定量 RT-qPCR 测定繁殖周期母牦牛主要生殖器官中的相对表达量，用SPSS19.0软件对试验数据进行差异显著性分析。【结果】成功克隆出包含完整编码区的牦牛HSP27基因序列，其编码区长450bp（GenBank 登录号：KP716832），可编码149个氨基酸，其中含量最高的是亮氨酸Leu（10.7%），含量最低的是色氨酸Trp（0.7%）。HSP27编码区蛋白原子个数为2366，分子式为C747H1189N205O220S5，分子量为16.722kD，理论等电点为5.33；HSP27编码蛋白为非跨膜可溶性蛋白。同源性分析显示，牦牛HSP27基因的核苷酸序列与家牛、印度水牛、绵羊、藏羚羊、虎鲸、野骆驼、野猪、马、灰狼、人和猩猩的核苷酸序列同源性分别为99.8%、98.4%、97.8%、97.6%、90.3%、89.7%、89.7%、86.7%、86.7%、85.5%和85.3%，牦牛HSP27基因的氨基酸序列与家牛、印度水牛、绵羊、藏羚羊、虎鲸、野骆驼、野猪、马、灰狼、人和猩猩的氨基酸序列同源性分别为100%、100%、100%、100%、96.3%、100%、96.8%、100%、100%、96.3%和96.3%；系统进化树表明，牦牛HSP27基因与家牛、印度水牛、绵羊和藏羚羊的进化水平较为相近，与灰狼、猩猩和人类的较远。RT-qPCR结果表明，牦牛HSP27基因在卵泡期、黄体期、妊娠期不同时期的卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达，其中在卵泡期卵巢中的表达量最高，在黄体期子宫中的表达量最低；在不同繁殖周期，牦牛HSP27基因在卵巢中的表达均极显著大于在子宫中的表达，其在卵巢、输卵管和子宫的表达因妊娠而发生了显著变化。【结论】通过与其他物种HSP27基因的同源性对比分析，发现HSP27基因在进化中具有高度保守性，同时也存在种属特异性；通过对HSP27在繁殖周期母牦牛主要生殖器官中的表达情况分析，推测出HSP27可能参与了母牦牛妊娠的调控，为进一步探讨HSP27在牦牛生殖过程中发挥的作用提供了参考资料。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余四九	甘肃农业大学动物医学院	165	736	11.0	19.0
2	樊江峰	甘肃农业大学动物医学院	32	116	7.0	9.0
3	崔燕	甘肃农业大学动物医学院	119	412	10.0	13.0
4	刘鹏刚	甘肃农业大学动物医学院	17	34	3.0	5.0
5	潘阳阳	甘肃农业大学动物医学院	40	69	5.0	7.0
6	何翃闳	甘肃农业大学动物医学院	11	18	2.0	4.0
7	胡威	甘肃农业大学动物医学院	4	21	3.0	4.0
8	李秦	甘肃农业大学动物医学院	6	21	2.0	4.0
9	张译夫	甘肃农业大学动物医学院	4	14	2.0	3.0