TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制

• 作者: 于敏莉 李东锋 杜文兴 林凯 虞德兵 解晓东
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 卵泡抑素(Follistatin) 骨骼肌卫星细胞 增殖 鸭
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 2460-2468
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.12.019

摘要

【目的】卵泡抑素（Follistatin）能够调节骨骼肌肥大和脂肪沉积，可促进骨骼肌卫星细胞增殖。拟采用体外重组 Follistatin处理增殖期的鸭骨骼肌卫星细胞，阐明TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制。【方法】以孵化14 d的鸭胚为试验材料，采用差速贴壁的方法分离骨骼肌卫星细胞，待细胞长到70%—80%时，将培养基换成含有浓度分别为0、1、10、100 ng·mL-1的Follistatin培养基，继续培养36 h后，采用CCK-8检测骨骼肌卫星细胞增殖情况；使用抗pax7抗体染色，DAPI染核，鉴定骨骼肌卫星细胞；采用real-time qPCR方法检测Follistatin对骨骼肌卫星细胞增殖过程中的标记基因PCNA、生肌因子基因MyoD和TGF-β信号通路中TGF-β、Smad2和Smad3的表达的影响。【结果】在倒置显微镜下观察，传代培养12 h鸭骨骼肌细胞一部分未贴壁呈圆形，一部分贴壁呈梭形。24 h后细胞全部贴壁，细胞略有变长。2 d后细胞继续增多，且呈长梭形。3 d后细胞数目增加，个别细胞融合。4 d后细胞数目进一步增加，细胞变粗，个别细胞融合。5 d后有少量细胞开始分化，细胞进一步融合。Pax7免疫荧光染色分析显示，95%以上的细胞中Pax7呈阳性表达；CCK-8检测细胞增殖分析表明，不同浓度的 Follistatin 处理鸭骨骼肌卫星细胞后，各处理组细胞增殖均显著高于对照组(P＜0.01)，且10 ng·mL-1 Follistatin处理鸭骨骼肌卫星细胞增殖效果最明显，为最佳处理浓度；与对照组相比，10 ng·mL-1 Follistatin处理组的MyoD基因表达量显著下降(P＜0.05)，PCNA基因表达量显著升高(P＜0.05)，Myf5基因表达量显著升高，TGF-β和Smad2基因表达显著升高(P＜0.05)，且Smad3基因表达量极限著升高(P＜0.01)；Western blotting检测蛋白表达水平结果表明，与对照组相比，TGF-β、Smad2和Smad3磷酸化水平也显著升高。【结论】10 ng·mL-1 Follistatin能显著促进鸭骨骼肌卫星细胞增殖，这一过程可通过TGF-β/Smad信号通路实现。使用最佳Follistatin处理浓度能够显著促进鸭骨骼肌卫星细胞增殖,该研究为鸭骨骼肌生长发育调控机理研究奠定分子基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜文兴	南京农业大学动物科技学院遗传育种实验室	66	605	15.0	22.0
2	虞德兵	南京农业大学动物科技学院遗传育种实验室	36	358	12.0	17.0
3	解晓东	南京农业大学动物科技学院遗传育种实验室	5	24	3.0	4.0
4	于敏莉	南京农业大学动物科技学院遗传育种实验室	9	31	2.0	5.0
5	林凯	南京农业大学动物科技学院遗传育种实验室	2	16	1.0	2.0
6	李东锋	南京农业大学动物科技学院遗传育种实验室	5	15	1.0	3.0