结核病药效评价用结核分枝杆菌参考菌株的筛选

• 作者: 万康林 卢锦标 吴小翠 张婷 杨蕾 王国治 邓海清 陈保文 黄长江
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 药敏实验 基因测序 基因分型 菌株筛选
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 160-166
• 分类号: R378.91+1
• 语种: 中文

摘要

目的 筛选结核病(tuberculosis,TB)药效评价用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)国家参考菌株.方法 取169株MTB临床分离株,采用结核杆菌生长指示管(mycobacterial growth indicator tube,MGIT)960液体培养基,对4种一线抗TB药物[链霉素(streptomycin,STR)、异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)和乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]进行药敏试验,并对耐INH和/或耐RFP的菌株的相关耐药基因位点进行测序,确认突变位点;用间隔区寡核苷酸分型法(Spoligotyping)对所有菌株进行基因分型,多位点可变数量串联重复序列分型方法(mutiple loci VNTR analysis,MLVA)对北京家族MTB临床分离株进行基因分型.结果 169株MTB临床分离株中耐STR 118株,INH 143株,RFP 129株,EMB 95株,耐多药(至少对NIH和RFP耐药)120株,单耐INH 5株,单耐RFP7株,四种抗TB药均敏感共11株.143株INH耐药菌株中,katG基因突变菌株占76.9％,inhA基因突变菌株占27.3％,aphC基因突变菌株占25.2％,至少2个基因发生突变的菌株有31株;129株RFP耐药菌株中,rpoB基因531位点发生突变,占67.4％,526位发生突变,占17.8％,516位点发生突变,占16.3％,至少2个位点发生突变的菌株有10株.169株MTB临床分离株分为北京家族和非北京家族,北京家族111株;非北京家族58株,主要有CAS家族2株,EAI家族7株,H家族11株,LAM家族6株,MANU家族6株,T家族7株,U家族1株,X3家族3株,还有15株在数据库中未表现的新基因型.111株北京家族MTB临床分离株分为4大群,其中Ⅱ群分布最广,占68.5％,代表性最好.筛选出耐多药菌株27株,敏感菌株5株,单耐异烟肼2株,单耐利福平3株.结论 成功筛选出敏感菌株、单耐药菌株、MDR菌株作为候选菌株.