多聚泛素UBI4低表达对新生隐球菌生长与毒力的功能影响

• 作者: 周兆婧 孟云芳 廖万清 张超 方伟 杨雅骊 桑军军 法振宗 赵静宇
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 新生隐球菌 多聚泛素 致病机制 应激应答
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 16-21
• 页数: 6页
• 分类号: R379.5
• 字数: 5312字
• 语种: 中文

摘要

目的：构建新生隐球菌的多聚泛素UBI4低表达菌株，检测UBI4低表达对新生隐球菌生长和毒力的功能影响。方法采用融合PCR方法，扩增含有UBI4基因的片段，将其与含有组蛋白启动子的质粒融合。通过基因枪将重组质粒片段转化入新生隐球菌，应用PCR筛选、DNA序列测序以及实时定量PCR方法对基因重建株进行鉴定与验证。检测多聚泛素UBI4低表达菌株对多种应激耐受力、生长曲线以及对蜡蛾感染的毒力影响。结果成功构建了新生隐球菌多聚泛素UBI4低表达。表型检测结果提示：较之标准株，UBI4低表达株生长速率下降，对高温、H2 O2和NO应激以及多种抗真菌药物敏感性显著增强；同时，UBI4下调表达后隐球菌对蜡蛾的毒力显著下调。结论我们的研究初步证实多聚泛素蛋白UBI4对新生隐球菌的生长增殖、应激应答以及感染能力具有重要的调控作用，为后续深入探讨新生隐球菌泛素系统的功能机制奠定基础。