鸡α干扰素／白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究

• 作者: 任涛 何静 向斌 孙敏华 康银峰 张盼盼 谢鹏 谭阳通 韩翡
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡α干扰素 鸡白细胞介素18 融合PCR 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4343字
• 语种: 中文

摘要

目的构建原核表达载体pET28a-rChIFN-α-ChIL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测，研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂，以对鸡的病毒性疾病进行防治。方法采用融合PCR （ Fusion PCR ）方法，利用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素（Chicken interferon alpha，ChIFN-α）与鸡白细胞介素18（Chicken interleukin-18，ChIL-18）基因构建ChIFN-α-ChIL-18融合基因并克隆入pET-28 a原核表达载体中进行原核表达。通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白，并进行 SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-ChIL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒（VSV）及新城疫病毒（NDV）增殖活性。结果和结论成功构建并克隆了pET28a-rChIFN-α-ChIL-18融合基因。融合基因在大肠埃希菌中表达的rChIFN-α-ChIL-18蛋白相对分子质量约为38000，蛋白经纯化后纯度在90％以上。 rChIFN-α-ChIL-18蛋白在鸡胚成纤维（ CEF）细胞上具有明显抗病毒活性，其抗VSV和NDV的活性明显高于单一rChIFN-α、rChIL-18蛋白的抗病毒活性。