鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究

• 作者: 刘光辉 刘梅芬 吴志明 张志凌 谢彩华 闫若潜
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡α干扰素 鸡白细胞介素2 嵌合基因 融合表达 活性
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 594-604
• 页数: 11页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.03.021

摘要

[目的]研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治.[方法]采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过-基因柔性接头将鸡α干扰素(chickeninterferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达.通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化.采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性.采用ChIL-2 ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性.分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2亚型病毒(AIV HgN2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性.分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性.[结果]成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因.嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kD,蛋白经纯化后纯度在96%以上.rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性;rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应.IFN-α活性单位为200 IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIVH9N2所引起的鸡胚死亡和胚体出血,并能显著延长鸡胚存活时间,但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降.合适剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内具有显著的抗病毒活性和免疫增强活性.[结论] rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性,这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴志明		61	371	11.0	15.0
2	张志凌		21	138	7.0	11.0
3	闫若潜		94	467	12.0	17.0
4	刘光辉		44	130	7.0	10.0
5	谢彩华		24	81	6.0	9.0
6	刘梅芬		13	85	5.0	9.0