PHLPP2基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及对舌癌细胞Tca8113增殖的影响

• 作者: 叶棋浓 夏靖霖 姜丽娜 张菊会 杜佩云 林佳佳 王恩群 程龙 麦宏旭
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: PHLPP2 舌癌 慢病毒属 细胞增殖 AktSer473
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 915-918
• 页数: 4页
• 分类号: R373|R739.86
• 字数: 3444字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.12.007

摘要

目的 构建稳定表达PHLPP2小发夹RNA( shRNA)的Tca8113细胞系,研究敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化水平和Tca8113细胞生长的影响. 方法 利用RNA干扰( RNAi )技术,设计并合成针对PHLPP2 基因的shRNA,并将其克隆到shRNA表达载体PSIH-H1上. 经测序成功后,包装病毒并感染舌癌细胞Tca8113,建立敲低PHLPP2的稳定细胞株. 通过实时定量PCR( qRT-PCR)和Western印迹实验检测RNAi的干扰效果. 利用Western印迹实验和细胞生长曲线检测敲低PHLPP2对Akt Ser473磷酸化及细胞生长的影响. 结果 经测序证明,成功构建PHLPP2 shRNA真核表达载体. qRT-PCR和Western印迹实验证明,构建的shRNA能有效抑制PHLPP2的表达,并构建敲低PHLPP2基因的Tca8113稳定细胞系. 实验表明,敲低PHLPP2可促进细胞的生长并升高Akt Ser473的磷酸化水平. 结论 成功构建PHLPP2基因的shRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制PHLPP2基因的表达,且能升高Akt Ser473的磷酸化水平并促进细胞的生长,为进一步研究PHLPP2在舌癌中的功能及机制奠定了基础.