大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定

• 作者: 何湘君 姜娟 孙宁玲 王翔凌 王鲁雁 郭晓夏 马丽萍
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: PER2基因 RNA干扰 慢病毒载体 血管平滑肌细胞 时钟基因
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 16-21
• 页数: 6页
• 分类号: R349
• 语种: 中文
• DOI: 10.7652/jdyxb201401004

摘要

目的 构建及筛选有效干扰大鼠血管平滑肌细胞PER2基因的shRNA慢病毒载体,并测定其干扰效率.方法 设计大鼠PER2的siRNA靶序列,插入慢病毒载体质粒pGLV-U6-EGFP中,构建pLentivirus-per2-rat表达重组体并转染至A7r5大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内,利用Real-time PCR方法检测PER2基因的mRNA表达水平,筛选有效沉默钟基因PER2表达的RNAi慢病毒载体.结果 经电泳、基因测序证实插入的目的序列正确,有PER2表达,成功构建了pLentivirus-per2-rat表达重组体;转染慢病毒载体pLentivirus-per2-rat至A7r5大鼠胸血管平滑肌细胞,测定转染效率达70%;Real-time PCR检测PER2基因的mRNA相对表达量,筛选出有效干扰大鼠血管平滑肌细胞钟基因Per2表达的siRNA片段,使PER2 mRNA表达量下调约84%.结论 成功构建了大鼠PER2的RNAi慢病毒载体,为进一步研究时钟基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙宁玲	北京大学人民医院心内科	357	3307	29.0	44.0
2	何湘君	北京大学人民医院中心实验室	27	242	10.0	14.0
3	王鲁雁	北京大学人民医院心内科	20	172	7.0	13.0
4	马丽萍	北京大学人民医院中心实验室	33	189	8.0	12.0
5	姜娟	北京大学人民医院心内科	10	19	2.0	4.0
6	王翔凌	北京大学人民医院心内科	5	17	3.0	3.0
8	郭晓夏	北京大学人民医院心内科	7	33	3.0	5.0