大鼠CD80基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 姜睿 孙梅 张兴义 李金东 王荣有 罗树立 金成彦 高楠
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CD80基因 RNAi 慢病毒
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1014-1018
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4496字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建大鼠CD80基因的RNAi慢病毒载体并在大鼠NRK和IEC6细胞上鉴定其沉默效率.方法:将筛选获得的大鼠CD80基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA并退火成双链DNA,与pGCSIL-GFP慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.经由293T细胞包装shRNA慢病毒颗粒,随后将其感染大鼠NRK细胞、IEC6细胞和大鼠DC细胞(树突状细胞,Dentritic cell),分别采用Real-time PCR和Western blot方法检测靶基因在mRNA和蛋白质水平的沉默效率.结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到4×10~8 TU/ml.shRNA慢病毒颗粒感染NRK和IEC6细胞后CD80基因的 mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了66.9%和63.5%.结论:成功构建了大鼠CD80基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在细胞水平有效沉默靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高楠	吉林大学中日联谊医院胸外科	17	61	4.0	7.0
2	孙梅	吉林大学第二医院病理科	35	116	7.0	9.0
3	李金东	吉林大学第二医院胸外科	9	26	3.0	4.0
4	姜睿	吉林大学中日联谊医院骨科	14	48	3.0	6.0
5	金成彦	吉林大学第二医院胸外科	8	22	2.0	4.0
6	罗树立	吉林大学第二医院胸外科	2	4	1.0	2.0
7	王荣有	吉林大学第二医院胸外科	16	46	4.0	6.0
8	张兴义	吉林大学第二医院胸外科	28	71	4.0	7.0