增殖抑制基因（HSG）RNAi 慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 刘洁琳 刘雅 张岩巍 李榕 楼煜清 温绍君 王佐广 韩宝惠
• 来源期刊: 北京生物医学工程
• 学科: 医学
• 关键词: RNA 干扰 慢病毒干扰 增值抑制基因 肺肿瘤
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 389-393
• 页数: 5页
• 分类号: R318|Q78
• 字数: 3420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-3208.2015.04.12

摘要

目的：为研究 HSG 基因不同表达程度对肺癌细胞的影响，构建并鉴定 HSG 基因 RNA 干扰慢病毒表达载体，以建立 HSG 基因沉默的人肺癌细胞株。方法针对 HSG mRNA 设计了4条 siRNA，并构建 pGCSIL-GFP-HSG 慢病毒质粒，通过测序鉴定。采用构建的 pGCSIL-GFP-HSG，pHelper1.0和pHelper2.0共感染293T 细胞，包装产生慢病毒，测定其滴度。将慢病毒转染人肺腺癌细胞株 A549，通过 real-time PCR 分析 HSG 基因表达。结果测序结果显示，DNA 序列与实验要求序列一致，提示插入人HSG 基因 RNAi 序列正确。荧光显微镜观察转染慢病毒包装质粒后的细胞，见细胞生长良好，荧光强度强烈。测定病毒滴度为3×108 TU / ml。real-time PCR 分析提示 RNA 干扰病毒感染 A549细胞株后，HSG基因表达显著下调。结论人 HSG 基因 RNAi 慢病毒载体构建成功，可用于肿瘤学的进一步应用。