人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 张鹏 王庆苓
• 来源期刊: 临床与实验病理学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Midkine RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 355-359
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 3065字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13315/j.cnki.cjcep.2014.04.001

摘要

目的：构建人Midkine( MK)基因RNA干扰( RNA interference, RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1．0和pHelper 2．0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108 TU/ml。感染 MDA-MB-231细胞后, RT-PCR 检测结果表明, GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87．2%( P<0．05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王庆苓	徐州医学院病理学教研室	29	61	4.0	6.0
2	张鹏	徐州医学院病理学教研室	13	15	2.0	3.0