人CDK2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 丁海明 包杰 庄俊华 熊石龙 王前 郑磊 陈晓 黄妩姣 黄宪章
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,CDK2 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1246-1248
• 页数: 3页
• 分类号: R363
• 字数: 2750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2008.06.044

摘要

目的:构建人细胞周期素依赖蛋白激酶2(CDK2)基因RNA干扰慢病毒载体.方法:利用Invitrogen公司在线软件设计人CDK2 (NM001798) shRNA序列,退火形成ds oligo后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序,再与慢病毒载体重组,测序鉴定,在脂质体的介导下将慢病毒的包装混合物和CDK2基因重组慢病毒载体转染293FT细胞,包装成病毒后,收集细胞培养上清液,测定病毒滴度.结果:测序证实pENTRTM/U6-CDK2-shRNA为阳性克隆,与慢病毒载体重组后测序结果显示也为阳性克隆,CDK2基因重组慢病毒载体传染293FT细胞后48h,细胞培养上清液,病毒的滴度为6×108TU/L.结论:成功构建人CDK2基因RNAi慢病毒载体,为研究CDK2在自身免疫病中的应用提供了稳定的转染细胞载体.