KIR2DS2 基因 RNAi 慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: YU Li 于力 卢学春 康慧媛 王畅 窦立萍 范辉 薄剑 达万明 靳海杰 韩晓萍 高春记
• 来源期刊: 军医进修学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: RNA 小分子干扰 KIR2DS2 慢病毒属
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 128-130
• 页数: 3页
• 分类号: R394.111
• 字数: 2542字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1139.2008.02.018

摘要

目的:构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体.方法:针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shKIR2DS2慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV-shKIR2DS2及Packaging system质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果:PCR和测序证实,成功构建KIR2DS2shRNA的慢病毒载体LV-shKIR2DS2.293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml.结论:成功构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA的RNAi慢病毒载体.