FGL2基因RNAi慢病毒载体的构建及外源性筛选与鉴定

• 作者: 王慧方 郑振中
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒载体 RNA干扰 FGL2基因
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1165-1168
• 分类号: Q782
• 字数: 3398字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1492.2012.10.005

摘要

目的 拟构建人纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)凝血酶原酶基因RNA干扰慢病毒载体,为调控人FGL2凝血酶原酶表达水平提供有利的工具.方法 根据人FGL2凝血酶原酶基因的mRNA序列选择4条靶序列,设计合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切后的pGCSIL-GFP 载体连接产生FGL2慢病毒载体,采用PCR及测序鉴定,应用Western blot 技术外源性筛选干扰效率高的有效靶序列.用慢病毒包装系统pGCSIL-GFP、pHelper1.0和pHelper2.0共转染包装293T细胞,包装产生慢病毒,以系列稀释法测定病毒滴度.结果 PCR扩增和测序结果显示,人FGL2凝血酶原酶核苷酸链序列插入正确,外源性筛选确定一条干扰效率高的有效靶序列.利用筛选确定的有效靶序列,包装产生慢病毒,其浓缩病毒悬液的滴度为1×109 TU/ml.结论 证实实验成功构建了FGL2基因RNA干扰慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑振中	南昌大学第一附属医院心血管内科	17	40	3.0	6.0
2	王慧方	南昌大学第一附属医院心血管内科	1	2	1.0	1.0