PINCH-1基因RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 孔佩艳 张曦 徐葳 曾东风 陈幸华
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 慢病毒属 绿色荧光蛋白质类 PINCH-1
• 年，卷（期）: 2011,（30）
• 所属期刊栏目: 血液病学专题
• 页码范围: 3029-3031
• 分类号: R781.62
• 字数: 3588字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2011.30.006

摘要

目的 构建人PINCH-1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并转染人骨髓基质细胞初鉴定转染效果.方法 利用RNAi设计软件,设计合成针对人PINCH-1基因的特异性siRNA序列,利用酶切反应合成包含特异性shRNA序列的pGCSIL-GFP慢病毒载体GC-shBC047440,通过GC-shBC047440与pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装293FT细胞产毒,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定.获取的病毒上清筛选最适感染复数(MOI值),并感染骨髓基质细胞,RT-PCR和Western blot检测重组慢病毒对骨髓基质细胞PINCH-1蛋白和RNA表达的影响.结果 酶切鉴定证实成功构建针对人PINCH-1基因的RNAi慢病毒干扰载体GC-shBC047440,载体感染人骨髓基质细胞后PINCH-1 RNA表达较未感染组和空载体对照组显著下降.结论 成功构建针对人PINCH-1基因的RNAi慢病毒载体,该载体能有效沉默PINCH-1基因的表达.