大鼠TGF-β1基因shRNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 贾春松 赵彦坡
• 来源期刊: 川北医学院学报
• 关键词: 转化生长因子-β1 RNA干扰 慢病毒载体 原代逼尿肌细胞
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 177-182
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-3697.2020.02.02

摘要

目的:构建大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)基因短发卡RNA干扰慢病毒载体,并通过感染大鼠原代逼尿肌细胞进行鉴定.方法:根据大鼠TGF-β1基因设计合成3对shRNA序列,将其分别连接至带荧光标签和抗性基因的慢病毒载体pHBLV上,通过转化至DH5α感受态细胞,提取阳性克隆后用DNA测序进行鉴定,选择序列正确的克隆大量扩增并提取重组的慢病毒质粒.将重组慢病毒质粒和慢病毒包装的辅助质粒转染至293T细胞进行慢病毒包被,抗性筛选后通过荧光法对病毒进行滴度测定.用慢病毒感染大鼠原代逼尿肌细胞,通过qRT-PCR和Western blot检测TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:设计的3种大鼠TGF-β1 shRNA干扰慢病毒载体经测序鉴定构建成功.使用该病毒感染大鼠原代逼尿肌细胞,qRT-PCR和Western blot结果显示,与空白对照组和阴性对照组相比,3种TGF-β1 shRNA感染组的细胞TGF-β1在mRNA和蛋白水平均有不同程度的下调,其中TGF-β1 shRNA 2的蛋白敲低效率最好(57％).结论:本研究成功构建了大鼠TGF-β1 shR-NA干扰慢病毒载体,并在大鼠原代逼尿肌细胞中进行了鉴定,为进一步的基因治疗研究提供了可能性的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵彦坡	北京市门头沟区医院神经内科	3	21	1.0	3.0
2	贾春松	首都医科大学宣武医院泌尿外科	3	3	1.0	1.0