绵羊抑制素shRNA慢病毒干扰载体的构建与鉴定

• 作者: 张瑞杰 苗向阳
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 抑制素α亚基 慢病毒 小发夹RNA RNA干扰 绵羊
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 21-27
• 分类号: Q78
• 字数: 6116字
• 语种: 中文

摘要

构建并鉴定了针对绵羊抑制素α亚基(INHA)基因的shRNA(Small hairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰载体,为进一步制备优质、高产转基因绵羊奠定基础.设计并合成4条针对绵羊INHA基因的shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及2条阴性对照序列(NC1、NC2),将其分别连接到空载体pGFP-V-RS中,得到4个shRNA 表达载体(即shRNA干扰载体)pGFP-V-RS-shRNA和2个阴性对照载体pGFP-V-RS-NC;同时构建绵羊INHA的高效表达载体pIRES2-eGFP-INHA,然后将构建好的4个shRNA干扰载体及2个阴性对照载体分别与INHA高效表达载体瞬时共转染293T细胞,qPCR法进行干扰效果筛选,挑选干扰效果最佳的shRNA干扰载体构建成慢病毒干扰载体.qPCR检测结果表明,shRNA干扰载体pGFP-V-RS-shRNA3的干扰效果最好,用它构建的慢病毒干扰载体经测序验证表明其已建成功.绵羊INHA shRNA慢病毒干扰载体构建成功,为进一步制备优质高繁转基因绵羊奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苗向阳	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	71	407	11.0	16.0
2	张瑞杰	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	4	80	3.0	4.0