绵羊NYD-SP27基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

• 作者: 徐锦凤 李娜 袁力明 赛务加甫 陈云蕾 马亚茹
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: NYD-SP27基因 干扰片段 慢病毒 HEK-293FT
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 31-37
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5654字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.05.006

摘要

构建并筛选针对干扰绵羊NYD-SP27基因的shRNA慢病毒载体.使用RNAi Target Sequence Selector软件设计并合成针对绵羊NYD-SP27基因的4条shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及1条阴性对照序列(NC),分别将其连接到载体pLentiLox3.7 (PLL3.7)中,得到4个shRNA干扰载体NYDSP27-shRNA及1条阴性对照载体NC-shRNA,同时将构建好的干扰载体及辅助质粒瞬时共转染至HEK-293FT细胞中,收集病毒液纯化后感染SP27-21细胞,48 h后用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NYD-SP27相对表达量,将干扰效果最好的载体用于进一步的研究中.结果表明,构建了重组慢病毒干扰载体,并成功包装成干扰慢病毒NYDSP27-shRNA-LV以及用来感染BHK-SP27-21细胞,48 h后用实时定量PCR筛选出高效干扰绵羊NYD-SP27的片段NYDSP27-shRNA-1.为进一步研究NYD-SP27基因表达下调对绵羊精子发育的影响奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李娜	石河子大学动物科技学院	52	235	7.0	12.0
2	赛务加甫	石河子大学动物科技学院	39	52	3.0	5.0
3	马亚茹	石河子大学生命科学学院	5	15	2.0	3.0
4	陈云蕾	石河子大学动物科技学院	4	2	1.0	1.0
5	袁力明	石河子大学动物科技学院	3	2	1.0	1.0
6	徐锦凤	石河子大学生命科学学院	3	5	2.0	2.0