绵羊NYD-SP27基因在BHK-21细胞中的稳定表达及其特征鉴定

• 作者: 加米拉 徐锦凤 王红红 胡广东 赛务加甫 陈创夫 马亚茹
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊NYD-SP27基因 稳定表达 BHK-21细胞 P2A
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术与繁殖
• 页码范围: 637-644
• 页数: 8页
• 分类号: S826.2
• 字数: 5372字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.006

摘要

旨在构建稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞株,对NYD-SP27基因的表达特征进行分析,为进一步研究NYD-SP27基因功能奠定基础.本研究克隆绵羊NYD-SP27基因,并将其插入到真核表达载体pD-sRedl C1中,利用猪捷申病毒2A肽(P2A)将NYDSP27蛋白和红色荧光蛋白连接以实现共表达,将重组质粒pDsRed-P2 A-Flag-NYDSP转染至BHK-21细胞中,经G418筛选获得稳定转基因细胞株,利用RT-PCR、间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot对NYDSP27基因的表达进行鉴定.结果表明,NYD-SP27基因稳定整合至宿主细胞基因组;NYD-SP27蛋白能够在BHK-21细胞中正常表达,分子大小约为63ku;在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中,P2A成功自我剪切.本研究成功构建了绵羊NYD-SP27基因的真核表达载体,建立了稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡广东	石河子大学动物科技学院	15	8	2.0	2.0
2	陈创夫	石河子大学动物科技学院	192	732	14.0	17.0
3	赛务加甫	石河子大学动物科技学院	39	52	3.0	5.0
4	马亚茹	石河子大学生命科学学院	5	15	2.0	3.0
5	徐锦凤	石河子大学生命科学学院	3	5	2.0	2.0
6	王红红	石河子大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
7	加米拉	石河子大学动物科技学院	3	1	1.0	1.0