重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达

• 作者: 乔军 刘红霞 房永祥 才学鹏 景志忠 潘小梅 贾万忠 郭爱疆
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪囊尾蚴 AgB基因 重叠延伸PCR 真核表达 BHK-21
• 年，卷（期）: 2009,（7）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 2572-2578
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文

摘要

[目的]克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达.[方法]采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列.采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR mothod,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切,PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞.通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达.[结果]琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同.重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现.表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别. [结论]通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达.