RNA干扰USE1基因慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘香男 彭康莉 王佳悦 赵博
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 泛素结合酶USE1 RNA干扰 慢病毒载体 泛素化
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 117-122
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0659

摘要

旨在构建泛素结合酶USE1基因的RNA干扰慢病毒载体,并在细胞中检测该基因的抑制表达水平,以期寻找Uba6-USE1特异性泛素化通路对应的下游底物并研究其功能.选取并合成靶向USE1基因的特异性shRNA序列,将其克隆至pLL3.7慢病毒抑制表达载体上,构建抑制USE1基因表达的重组慢病毒质粒并鉴定.将鉴定成功的重组质粒与psPAX2、VSVG慢病毒包装载体共转染至HEK-293细胞,收集病毒上清,测定病毒滴度并确定最佳感染稀释倍数,通过qPCR和Western Blot方法检测病毒感染HEK-293细胞后对USE1基因的抑制程度,获得能有效抑制USE1基因的慢病毒上清.结果 显示,成功构建3种靶向USE1基因的RNA干扰慢病毒载体,获得滴度符合要求的3种慢病毒包装上清液,感染HEK-293细胞后发现,第2、3号shRNA序列均有明显抑制表达USE1基因效果,基因表达抑制率约50％(*P＜0.05).利用RNA干扰技术成功构建了特异性抑制泛素结合酶USE1基因表达的慢病毒载体,并经mRNA和蛋白水平检验得到2种能够显著抑制USE1表达的慢病毒上清及其shRNA序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵博	上海交通大学药学院	14	49	2.0	7.0
2	王佳悦	上海交通大学药学院	2	1	1.0	1.0
3	刘香男	上海交通大学药学院	1	1	1.0	1.0
4	彭康莉	上海交通大学药学院	3	1	1.0	1.0