人Notch-1基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 张庆庆 张森林 曹罡 朱迎兰 董震 陈伟
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Notch-1基因 慢病毒载体 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 专栏论著
• 页码范围: 267-272
• 页数: 6页
• 分类号: R782
• 字数: 4316字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7518/hxkq.2014.03.014

摘要

目的：构建及鉴定人Notch-1基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒载体，寻找最佳RNAi慢病毒载体。方法针对人Notch-1基因序列，按照RNAi序列设计原则，设计3段RNAi靶点序列（shRNA1~3），通过限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切、T4DNA连接酶连接，将Notch-1基因序列插入慢病毒载体pLenOR-THM，构建pLenOR-THM-Notch-1重组载体。质粒转化感受态DH5α细菌，筛选阳性克隆，经KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切及测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒四质粒系统共转染293T细胞，进行慢病毒包装并测定病毒滴度，观察感染效率。各组病毒载体转染ACC-M细胞后，运用定量逆转录聚合酶链反应和Westernblot检测Notch-1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果成功构建慢病毒载体pLenOR-THM-Notch-1，四质粒共转染293T细胞后可见大量绿色荧光；浓缩后的病毒滴度为5.8×108TU·mL-1；以复感染系数为1时感染293T细胞，感染效率在90％以上。QRT-PCR和Westernblot检测结果表明，pLenOR-Notch-1-shRNA3组受抑制程度最高。结论成功构建了人Notch-1RNAi慢病毒载体。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹罡	南京军区南京总医院口腔科	61	233	8.0	10.0
2	董震	南京军区南京总医院口腔科	61	383	11.0	16.0
3	张森林	南方医科大学南京临床医学院口腔科	91	592	12.0	19.0
5	陈伟	南方医科大学南京临床医学院口腔科	53	239	9.0	12.0
9	张庆庆	南方医科大学南京临床医学院口腔科	1	4	1.0	1.0
15	朱迎兰	南方医科大学南京临床医学院口腔科	3	16	2.0	3.0